光敏素试剂盒
光敏素试剂醋酸盐
亲和素-碱性磷酸酶检测系统
亲和素-碱性磷酸酶
BCIP(实验时 10mg溶于200μlDMF中)
NBT (实验时 15mg溶于200μl70%DMF中)
二甲基甲酰胺(DMF),仲丁醇,3MNaAC无水乙醇
光标记灯、离心机
1. 在一支**的Eppendof离心管中加入20μl探针DNA(0.5-1μg/μl,溶解于水中
2. 避光条件下加等体积的光敏生物素醋酸盐并混匀。
3. 将装有反应液的离心管置于冰模中,暗室中在光标记灯下照射30分钟(灯距样品15cm)。
4. 加入无菌水至总体积为100μl
5. 加入100μl仲丁醇,混匀。10000rpm离心10min,去上层液,再加入仲丁醇,离心,使水相浓缩至30-40μl。
6. 加入4μl的3M NaAC,混匀,再加入2体积的预冷无水乙醇,混匀,-20℃过夜或-70℃ 15min
7. 4℃15000rpm 离心15min,取桔红色沉淀。
8. 真空干燥,沉淀溶于无菌水中。
1. 仲丁醇与水能部分互溶,因此*好先用水将其饱和,以防DNA丢失,如不饱和则可起到浓缩水相的作用,
2. 买来的或要来的探针一般都保存在TE缓冲液中,因此在使用前脱盐,否则光敏素与Tris反应,使电泳条带拖尾。
3. 在沉淀探针时,NaAC能不加,尽量不加。沉淀离心是*好在低温下进行。
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