描述

1-NM-PP1是可渗透细胞的蛋白激酶D (PKD) 抑制剂，IC50 为0.398 μM。

相关类别

信号通路 >> 细胞凋亡 >> PKD

研究领域 >> 癌症

靶点

Cdk7as/as:50 nM (IC50)

体外研究

来自Cdk7as / as或Cdk7 + / +细胞的Cdk7被免*疫沉淀并测试其对含Pol II CTD的融合蛋白（GST-CTD）和人Cdk2的激酶活性。从突变体中回收的Cdk7，但不是野生型细胞，被1-NM-PP1（1-NMPP1）抑制，与任一底物的IC50为~50nM。用Cdk7as /替换野生型Cdk7也使得对1-NM-PP1敏感的HCT116细胞生长。在没有1-NM-PP1的情况下，野生型和Cdk7as / as细胞的群体倍增时间分别为~17.9和~20.2h，在异步培养中具有相似的细胞周期分布，表明Cdk7功能受到的影响*小。 F91G突变本身。纯合的Cdk7as / as细胞对1-NM-PP1敏感，然而，在暴露1-NM-PP1 96小时后通过细胞活力（MTT）测定测得IC50~100nM。相反，野生型HCT116细胞对10μM1-NM-PP1具有抗性。 10μM1-NM-PP1的添加延缓了突变体的G1 / S进展，但不抑制野生型细胞的G1 / S进展。当与血清同时添加至Cdk7as /作为细胞时，1-NM-PP1防止在接下来的15小时内任何进展至S期。 24小时后，有证据表明，Cdk7as /作为从血清饥饿中直接释放到含有1-NM-PP1的培养基中的细胞进入S期，而一部分保留在G1中。在血清添加后3小时或6小时添加1-NM-PP1可延迟S期进入约7小时或约3小时[1]。

激酶实验

进行免*疫印迹和免*疫沉淀以及免*疫复合物的激酶测定。为了测量Cdk1 /细胞周期蛋白B组装，从有丝分裂或G2细胞中提取（200μg总蛋白）与2μM1-NM-PP1或DMSO预孵育，然后加入500ng纯化的细胞周期蛋白B1，氨基末端用六组氨酸标记和Myc表位，以及ATP再生系统。在指出的情况下，孵育用400ng纯化的Csk1或600ng野生型或类似物敏感的T-环磷酸化的Cdk7 /细胞周期蛋白H / Mat1复合物补充。在室温下90分钟后，用抗Myc抗体免*疫沉淀Myc-细胞周期蛋白B和相关蛋白，并用抗Myc和抗Cdk1抗体对免*疫复合物进行免*疫印迹，并测试组蛋白H1激酶活性[1]。

细胞实验

通过在无血清培养基中孵育48小时使野生型或Cdk7as /作为HCT116细胞同步，并释放到含有10％胎牛血清的培养基中。进行与胸苷或诺考达唑的同步，并通过流式细胞术分析细胞周期分布。通过MTT测定法测量细胞活力[1]。

参考文献

[1]. Larochelle S, et al. Requirements for Cdk7 in the assembly of Cdk1/cyclin B and activation of Cdk2 revealed by chemical genetics in human cells. Mol Cell. 2007 Mar 23;25(6):839-50.

1-(2-Methyl-2-propanyl)-3-(1-naphthylmethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

1-NM-PP1

1-tert-butyl-3-(naphthalen-1-ylmethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

1-(1,1-dimethylethyl)-3-(1-naphthalenylmethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

1H-Pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine, 1-(1,1-dimethylethyl)-3-(1-naphthalenylmethyl)-

8278642

1-tert-butyl-3-(naphthalen-1-ylmethyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

4-Amino-1-tert-butyl-3-(1'-naphthylmethyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine

Mutant Kinases Inhibitor II

PP1 Analog II,1NM-PP1

1-NMPP1