氨基酸HPLC测定方法

问：小弟目前需要建立氨基酸的液相测定方法，其中涉及到衍生化的操作方法以及注意事项，希望大家能够多多帮忙！

答：*近刚做完一个氨基酸类的**，感觉应该注意以下几点：

1、首先要注意**。我用的是2，4二硝基氟苯做衍生化试剂，属于剧毒物质，据说有腐蚀性，弄到皮肤上洗不下来（深受受其害）。

2、衍生化试剂的量应该足够。由于试验人把浓度稀释错了，造成峰面积不稳定（让我郁闷了好几天）。

3、衍生化时间要足够。一般时间为60分钟，注意有时候制剂在60分钟内衍生化不完全，可能是辅料有影响。可以做一下比较。

答：氨基酸的HPLC测定一般需要衍生化，目前用得较多的是OPA试剂。

1、OPA柱前衍生HPLC-ECD测定法

2 、柱前衍生Waters,AccQ-Tag法；

3、 安捷伦**OPA,二级FMOC法。后两种都是紫外检测，其实氨基酸衍生化之后的紫外吸收效果也一般，假如您的样品含量较低，选用此方法很合适，也符合国家的标准；**种是电化学检测，也需要衍生化，我们做过，*低检出限0.2pmol。

附件：一个方法HPLC-ECD氨基酸的分析 Amino Acid Method方法.rar