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**细胞的采集和培养方法

方法一
1、稀释。我们要留血浆(肝素钠抗凝的采血管采的血,5~6ml),所以分离、取出血浆后加入和红细胞等体积的生理盐水,一般3ml左右,混匀。上海创赛科技提供肝素钠,Heparin sodium salt,商品编号:B11000262-1g,价格69.3元。
2、分离液,不在乎体积有多少,主要是高度,如果离心管很粗的话,就要多加一些,细一点的离心管就可以少加一些,一般高度要超过3cm。
3、分离血来源,**外周血比较好分,脐血和胎盘血不好分。当然,发生溶血和凝血的话就更难分了。
4、血的保存,采血后不要放到4度冰箱(当然更不能冻啦),常温,避光即可。从采血到分离不要超过12个小时,不然效果也不好。
5、离心速度和时间。不同的离心机,肯定转速不一样的,实验室一般用水平离心机2500转,20分钟,基本上没有红细胞了,**细胞也很多。
6、**细胞分离液的保存不必放在4度,常温即可,无论是否开封了的。以往经验,分离液一放到4度后,无论复温的效果如何,分离的效果都没以前好。上海创赛科技提供**细胞分离液,BR ,商品编号:D16-1013112-250ml,询价。
方法二
1.用0.85%生理盐水对倍稀释抗凝血液标本。
2.取**细胞分离液3-4ml于干净试管中。
3.往**细胞分离液上层缓缓加入2倍于分离液体积的稀释外周血量。
4.2000-2500RPM转速离心15分钟。上海创赛科技提供淋E23-TD4M血细胞洗涤离心机 ,商品编号:E23-TD4M-台,询价。
5.用吸管吸取中层白色浑浊液于eppendorf管-20℃保存待用。
注意事项
1、取血的质量很重要,分离界面清楚的总是血样质量好的),用Hanks对倍稀释!分离液一般是稀释血量的1/2!
2、离心时间很有关系各实验室离心机不同!
3、破碎红细胞用双蒸水少于一分钟。
4、试管的干净程度也有关系的。

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