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酸性磷酸酶的显示方法实验步骤介绍

实验试剂

1.  10％中性福尔马林(pH6．8～7．1)甲醛 10ml 蒸馏水 90ml 醋酸钠 2g
2.  酸性磷酸酶作用液
蒸馏水 90ml 0．2mol／L醋酸缓冲液(pH4．6) 12ml 5％硝酸铅 2ml
3.  2％β—甘油磷酸钠 4ml
先将蒸馏水和醋酸缓冲液混合，随后分成大致相等的两份，一份中加硝酸铅溶液，另一份加甘油磷酸钠溶液，然后再将两者缓缓混合，边混边搅匀后若酸碱度值不到pH5．0，可加少量醋酸的调整。此作用液*好在临用前配制，不能贮存。配好后的作用液应透明无絮状悬浮物和沉淀，否则将严重影响实验结果。
4.  1％硫化胺溶液
硫化胺 1ml 蒸馏水 9ml
5.  姬姆萨染液(1：30)
姬姆萨原液 3滴 磷酸盐缓冲液(pH6．8) 5ml
6.  6％淀粉肉汤
牛肉膏 0．3g 蛋白胨 1.0g 氯化钠 0．5g 蒸馏水 100ml

高压**9．9×104pa(15磅)20min，再加入可溶性淀粉6g，水温浴，促使溶解后置冰箱保存备用。


实验步骤

1. 取小白鼠一只，每日腹腔注射6％淀粉肉汤1ml，连续注射三天。
2. 在第三天注射后3～4h，再向腹腔注射生理盐水1ml，过3min后在原注射部位抽取腹腔液0．1～0．2ml。请注意!注射和抽液的进针部位和深度要保持一致。否则可能抽不出腹腔液。
3. 将腹腔液滴在预冷的载玻片上，每片1～2滴，涂片，将玻片垂直插入玻片架，迅速放到冰箱内(4℃)，让细胞自行铺展。
4. 30min后，将玻片转入10％中性福尔马林，冰箱内4℃固定30min。
5. 自来水漂洗5min，把水甩干。
6. 转入酸性磷酸酶作用液中，37℃处理30min。
7. 自来水漂洗片刻。
8. 1％硫化胺处理3～5min。
9. 自来水冲洗，甩干。
10.用1∶30的姬姆萨染液染色15min。
11.自来水冲去染液，用磷酸盐缓冲液临时封片，镜检。
12.对照实验：
将第3步的腹腔液涂片置50℃温箱中处理30min，使酶失活，再进行6～11步的同样实验。
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